原理: DAB 染色液是特别敏感的二步法免疫组化试剂盒,适合与兔或鼠源一抗配用。其主要过程为,一抗与切片中的靶抗原形成抗原抗体复合物,酶标羊抗鼠/兔 IgG 聚合物二抗(以多聚葡聚糖分子为骨架,辣根过氧化物酶与羊抗鼠/兔 IgG 形成的聚合物)与抗原抗体复合物中的一抗结合,再利用辣根过氧化物酶催化二氨基联苯胺(DAB)在抗原部位形成棕色显色。
产品货号:RC0080R ;
规格:100T
试剂盒组成:酶标羊抗兔IgG 聚合物二抗 4℃,5mL; DAB 显色剂(100x) A4℃,100ul;DAB显色缓冲液 B 4℃,10mL;3%过氧化氢,10mL;
使用方法:DAB显色缓冲液:DAB 显色剂(100x)=100:1; DAB显色工作液液C=A+B;
其他自备试剂:修复液,pbs,BSA等
操作流程如下:
石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-蒸馏水洗。
抗原修复:组织切片置于盛满EDTA抗原修复缓冲液(PH8.0)(其他抗原修复液可以根据情况选择)的修复盒中于微波炉内进行抗原修复,中火8min至沸,停火8min保温再转中低火7min,此过程中应防止缓冲液过度蒸发,切勿干片。自然冷却后将玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。
阻断内源性过氧化物酶:切片放入3%过氧化氢溶液(30%双氧水:纯水=1:9),室温避光孵育25 min,将玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。
非特异性封闭:切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈(防止抗体流走),在圈内滴加用3%BSA或者专用封闭液均匀覆盖组织,室温封闭30min。
加一抗:轻轻甩掉封闭液,在切片上滴加按一定比例配好的一抗工作液(可选择PBS或者一抗稀释液配制一抗工作液),切片平放于湿盒内4°C孵育过夜。(湿盒内加少量水防止抗体蒸发)
加二抗:玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加与一抗相应种属的酶标羊抗鼠/兔IgG 聚合物二抗覆盖组织,室温孵育50min。
DAB显色:玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加新鲜配制的DAB显色工作液液C,显微镜下控制显色时间,阳性为棕黄色,自来水冲洗切片终止显色。
石蜡切片免疫组化结果判读
苏木素染细胞核为蓝色,DAB显出的阳性表达为棕黄色
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